因此，immunoPCR也可用于抗原的半定量检测。巢式PCR的目标是提高扩增的特异性，这意味着在第一轮扩增中可能存在非特异性扩增，巢式PCR目标基因被第二次扩增，用于第二次扩增的模板是第一次扩增的产物，●通过逆转录PCR提取组织或细胞中的总RNA，并以mRNA为模板，通过逆转录酶使用Oligo（dT）或随机引物逆转录成cDNA。
半巢式pcr是巢式pcr的一种特殊类型。巢式pcr是在完成普通pcr的前提下继续扩增比普通pcr小的片段，可以增加特异性，而半巢式pcr是通过仅改变一个引物来扩增比普通PCR小的片段。由于在抗原量达到饱和之前，pcr产物与抗原-抗体复合物的量成正比，因此两轮PCR反应一般有特定的需求，如用单端引物和通用引物对基因及其外周基因进行第一轮扩增，然后对目标基因进行第二轮扩增；再比如巢式PCR，需要两轮放大。
嵌套的原因是第一次的产物量很少或扩增条件没有优化。没有必要纯化第一种产物。属于优化实验条件的步骤。你可以做一系列的稀释，比如你第二次飞行的反应体积是升，你可以不稀释直接加入。目的:扩增两个已知序列之间的DNA片段。因此，ELISA的最低检测极限得到了扩展，
一般来说，pcr在一把尺子上。如果发生这种情况，您可以尝试先测试第一轮产品的质量，如果不是很好，你能净化它吗，或者回收胶水来浓缩样品的浓度？如果第二轮有波段，建议回收目标波段作为模板后再进行第三轮。如果第三轮中没有波段，您实际上可以将第一轮的乘积进行排序，以查看它是否是您想要的。
